多功能氧化酶(MFO)測試盒微量法

本公司所有產品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產生降解反應，可使原化學物質變為低毒的或無毒的物質從體內排出；還可產生激活反應，可使原化學物質轉化為具有親電子性質，導致毒性增強，成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學物質相互作用的深入研究，對于從分子生物學水平上進一步了解外源性化學物質的毒作用具有重要意義。
測定原理：
MFO催化對硝基苯甲醚產生對硝基苯，在405nm下有特征吸光值。
自備用品：
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 14uL×1 支，4℃保存；

組織樣本的前處

①總 GAPDH 酶提取：建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。建議測定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本、5μL 試劑三和 190μL 工作液，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.572×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=5.144×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結果的穩定性。

公司正在出售的產品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產品都是現貨,產品核實好下單后即可當天發貨。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發貨前與銷售員聯系。

3、我司產品支持款到發貨、快遞代收尾款、網上現拍等付款方式。

4、質量保證,嚴格把關,如有產品異議經公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導。