?無菌操作?：細胞培養需在無菌環境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。

?試劑選擇?：所用培養液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養液。

?培養條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養通常需5%CO2以維持培養液pH值穩定。培養箱內濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態、生長狀態與培養液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

IMDM 培養基

Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)，Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium，用于培養紅細胞和巨噬細胞前體。此種培養液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞，LPS刺激的B細胞，骨髓造血細胞，T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養非常豐富的培養液，因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養。

 運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意僅限科研用。

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養基，放入 37℃水浴鍋中預熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養中，混勻后轉入

CO2 培養箱中培養靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，收集瓶內的培養基；

3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶，每個培養瓶各 1ml；

9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 大鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)試劑盒

HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 人纖維介素蛋白(fgl2)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanaldehydedehydrogenase,ALDH試劑盒人乙脫氫酶(ALDH)試劑盒規格：96T/48T

植物P型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次

Mouse6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISAKit小鼠6同前列腺素(6-K-PG)試劑盒規格：96T/48T

大鼠載脂蛋白A2(APOA2)試劑盒 ，英文名： APOA2 ELISA Kit

Mouse thioredoxin (x) ELISA Kit 小鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 小鼠巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanFactorVIII-relatedAigen,FVIIIAgELISAKit人第八因子相關抗原

細胞/組織基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒10/20次

ELISAKitMMP-鼠基質金屬蛋白酶10

兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用：   ELISA   規格：      進口分裝

磷酸化調節元件結合蛋白2抗體

血清學定義結腸癌抗原1抗體

ACE2重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor 0.5mgAh Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原

IZUMO4重組人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 標簽) Protein

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII /屬

IMDM 培養基鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein