實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品屬性：  

商品介紹：

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

狗 KIM1 / TIM1 基因全長ORF克隆

pCMV / hygro (C端FLAG標(biāo)簽) 陽性對照載體

pCMV / hygro (C端Myc標(biāo)簽) 陽性對照載體

pCMV / hygro (C端His標(biāo)簽) 陽性對照載體

pCMV / hygro (C端HA標(biāo)簽) 陽性對照載體

pCMV / hygro (FLAG標(biāo)簽) 陰性對照載體

pCMV / hygro (Myc標(biāo)簽) 陰性對照載體

pCMV / hygro (His標(biāo)簽) 陰性對照載體

pCMV / hygro (HA標(biāo)簽) 陰性對照載體

pCMV / hygro (無標(biāo)簽) 陰性對照載體

大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Calumenin

葡萄糖天門冬素培養(yǎng)基 英文名稱：Glucose Asparagine Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

3.12-200 ng/mL 人細(xì)胞間粘附分子4(ICAM4)ELISA試劑盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human UDP-glucuronosyltransferase 1-6

0.156-10 ng/mL 人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒

含0.2%可溶性淀粉的BCP脫脂奶粉平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基 英文名稱：BCP Medium with 0.2% Soluble Starch 產(chǎn)品規(guī)格：250g

15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor B

3.12-200 ng/mL 人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoenolpyruvate carboxykinase [GTP], mitochondrial

78-5000 pg/mL 人鱗狀細(xì)胞癌抗原1(SCCA1)ELISA試劑盒