細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

兔原代輸尿管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持兔原代輸尿管上皮細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含兔原代輸尿管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于兔原代輸尿管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

histone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽 0.5mghistone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽

BPIFA2 Protein Human 重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FCGR3A重組大鼠 CD16a / FCGR3A 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FABP1重組人 L-FABP / FABP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)試劑盒 ，英文名： Cr ELISA Kit

Rabbit ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 兔子α干擾素(IFN-α)試劑盒

伯氏疏(BB)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-1(Rabbitmaixmetalloproteinase1)ELISAKit兔基質(zhì)金屬蛋白酶1

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)活性比色法定量試劑盒20次

ELISAKitTn-Ⅰ犬肌鈣蛋白Ⅰ

轉(zhuǎn)氫酶-1試劑盒   紫外分光光度法   50管/48樣

轉(zhuǎn)氫酶-2試劑盒   紫外分光光度法   50管/48樣

α戊二酸脫氫酶（α-KGDH）測(cè)試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

檸檬酸（CA）含量測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白Ⅱ(IGFBP-Ⅱ)試劑盒

Human cyclic guanosine monophosphate (cGMP) ELISA Kit 人環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒

RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 兔型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAP12(Mouseapelin12)ELISAKit小鼠apelin12

血清樣品樹脂法去內(nèi)毒素試劑盒20次

Porcineierleukin17,IL-17ELISAKit豬白介素17(IL-17)試劑盒

丙酮酸脫氫酶α1抗體

粘蛋白-1單克隆抗體

兔原代輸尿管上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基FCGR3A重組大鼠 CD16a / FCGR3A 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

histone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽 0.5mghistone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽

FABP1重組人 L-FABP / FABP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BPIFA2 Protein Human 重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標(biāo)簽)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。