小鼠原代食管成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。

IRAK 2 白介素-1受體相關(guān)激酶2 0.5mgIRAK 2 白介素-1受體相關(guān)激酶2

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白

REG1B重組食蟹猴 REG1B / PSPS2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

RETN Protein Mouse 重組小鼠 Resistin / ADSF / RETN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

EPOR & CD131重組人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

大鼠多巴胺D2受體(D2R)試劑盒 ，英文名： D2R ELISA Kit

Porcine heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 豬熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒

蟹特定基因序列(Cytb)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLTE4ELISAKit大鼠白三烯E4

體液總抗氧化能力(TAC)化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒50次

ELISAKitCA雞酶

小鼠脂肪酸合成酶   英文名稱：   Mouse Fatty Acid Syhase   規(guī)格：      英文縮寫：   FAS

小鼠促卵泡生成激素   英文名稱：   Mouse Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   FSH

小鼠卵泡休止素   英文名稱：   Mouse Follistatin   規(guī)格：      英文縮寫：   FST

小鼠叉頭框蛋白O3   英文名稱：   Mouse Forkhead Box protein O3   規(guī)格：      英文縮寫：   FOXO3

小鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble tumor necrosis factor (sTNF a R) ELISA Kit 人可溶性壞死因子α受體(sTNFαR)試劑盒

Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit 人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor1,3-BetaD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶

飲料糖精(saccharin)含量薄層色譜法定性試劑盒20次

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒規(guī)格：96T/48T

β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體

PE標(biāo)記人CD47單克隆抗體

小鼠原代食管成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基REG1B重組食蟹猴 REG1B / PSPS2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IRAK 2 白介素-1受體相關(guān)激酶2 0.5mgIRAK 2 白介素-1受體相關(guān)激酶2

EPOR & CD131重組人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白

RETN Protein Mouse 重組小鼠 Resistin / ADSF / RETN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)