L6565 (小鼠白血病克隆細(xì)胞系)

產(chǎn)品簡介
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通用型植物樣品細(xì)胞周期G1/S和G2/M期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒 10次

產(chǎn)品廠地：上海市

更新時(shí)間：2025-02-24

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

訪問量：365

產(chǎn)品咨詢 15026555973

產(chǎn)品分類

技術(shù)文章

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品牌	其他品牌	貨號	GOY-01X0261
規(guī)格	1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	產(chǎn)品僅供科研使用	應(yīng)用領(lǐng)域	化工

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
L6565 (小鼠白血病克隆細(xì)胞系)	1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶	GOY-01X0261

商品介紹：

名稱 L6565 (小鼠白血病克隆細(xì)胞系)

種屬小鼠

年齡（性別）不詳

組織來源未知

生長特性懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣

背景描述L6565細(xì)胞源自L6565白血病小鼠的脾細(xì)胞懸液。L6565細(xì)胞染色體數(shù)從38-144不等；電鏡觀察證明，L6565細(xì)胞核邊界清晰，細(xì)胞質(zhì)中Oragnalles、A類、C類病毒顆粒豐富，細(xì)胞c-myc和c-fos過量表達(dá)。L6565細(xì)胞克隆是一株含有RNA病毒的淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞。

生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液；請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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2 ug YEP352 YEP352 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

10g 酸洗玻璃珠(直徑：400μm) 常溫

2 ug pAcGP67A pAcGP67A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

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